摘 要：肝癌是全球癌症相关死亡的第三大原因，生存率低且容易复发。为探究circHIPK3在肝癌中的调控机制，本研究通过实时荧光定量PCR方法分析HIPK3及其环状RNA circHIPK3的表达水平，结果显示，两者在肝癌细胞中显著上调。进一步通过双荧光素酶报告基因试验验证，circHIPK3直接与miR-599结合，且miR-599可靶向结合CD276的3'UTR区域。此外，构建si-circHIPK3稳定转染的肝癌细胞株并转染miR-599进行功能研究，结果表明，circHIPK3能够通过“海绵”吸附miR-599，从而解除其对CD276的抑制作用，促进CD276表达，进而增强肝癌细胞的增殖和迁移能力。本研究聚焦于circHIPK3/miR-599/CD276调控轴在肝癌中的调控作用机制，为阐明其恶性生物学行为提供了新的分子依据，提示其可能成为潜在的治疗靶点。
关键词：肝癌；环状同源域相互作用蛋白激酶；微小核糖核酸-599；分化簇276；治疗靶点摘 要：本文采用蜗牛酶协同超声波提取灵芝多糖，优化其提取工艺，并验证灵芝多糖的抗氧化活性。在单因素实验的基础上，考察酶解pH、酶解温度、酶解时间对灵芝多糖提取得率的影响，利用正交试验结合超声破碎法确定其最佳工艺条件，并采用自由基清除法（DPPH）、自由基阳离子清除法（ABTS）、铁离子还原/抗氧化能力法（FRAP）3种方法对提取的灵芝多糖进行抗氧化活性的测定。试验结果表明，提取灵芝多糖的最佳工艺条件：酶解pH值为5，酶解温度为50℃，酶解时间为2.5 h，超声破碎每次15 s，间歇30 s，共循环5次。在此条件下，灵芝多糖的提取得率为1.595%，且提取的灵芝多糖具有良好的抗氧化活性。本文为探究一种高提取得率、高抗氧化活性的灵芝多糖提取方法提供了思路。
关键词：灵芝多糖；蜗牛酶；超声波破碎法；酶解工艺；抗氧化摘 要：运用网络药理学和海马代谢组学技术研究开心散治疗阿尔茨海默病（AD）的潜在药物成分和作用机制。采用APP/PS1雄性小鼠作为AD模型，Morris水迷宫实验观察小鼠学习记忆能力，苏木精-伊红（HE）染色法观察小鼠海马CA1区病理变化。通过网络药理学对开心散入海马成分靶点和疾病靶点取交集，进行GO分析和KEGG通路富集分析，并进行蛋白质-蛋白质互作网络和分子对接分析。采用液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）代谢组学技术对小鼠海马进行代谢物检测，并筛选差异代谢物和代谢通路富集分析，最终将网络药理学和代谢组学结果进行综合分析。Morris水迷宫实验表明，开心散可以改善APP/PS1小鼠学习记忆能力；HE染色结果表明，开心散对小鼠中枢神经损伤有改善作用。LC-MS/MS鉴定出开心散入海马化合物466个，潜在治疗靶点87个，KEGG富集通路主要有脂质与动脉粥样硬化、胞葬作用、AD等；分子对接结果表明，开心散潜在药效成分和关键靶点结合水平较高。从海马中共筛选出501个差异代谢物，富集出6条代谢通路，通过网络药理学与代谢组学通路进行交集分析，得到亚油酸代谢和胆碱能突触等代谢通路。本研究表明，开心散入海马成分能够靶向AD疾病靶点，这些靶点与亚油酸代谢和胆碱能突触等通路相关，这可能是开心散治疗AD的潜在作用机制。
关键词：阿尔茨海默病；开心散；网络药理学；代谢组学；分子对接摘 要：为探究牛蒡子苷元（ATG）通过激活核因子E2相关因子2（Nrf2）/血红素加氧酶1（HO-1）信号通路和抑制NF-κB信号通路对庆大霉素（GM）所致急性肾损伤（AKI）大鼠的治疗作用和机制，本研究选取36只雄性SD大鼠，随机分为对照组（6只）和造模组（30只）。造模组连续7 d腹腔注射100 mg/kg GM建立AKI模型，造模成功的大鼠随机分为模型组、阳性对照组（5 mg/kg盐酸贝那普利）和ATG低、中、高（1、3、9 mg/kg ATG）剂量组，每组6只。检测大鼠血清尿素氮（BUN）、肌酐（SCR）、肾组织超氧化物歧化酶（SOD）、还原型谷胱甘肽（GSH）、过氧化氢酶（CAT）、丙二醛（MDA）、白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、肾损伤分子-1（KIM-1）的水平以及Nrf2、HO-1、核因子κB p65（NF-κB p65）的mRNA和蛋白表达水平。与模型组相比，ATG治疗后，大鼠血清BUN和SCR水平显著降低（P<0.01）。在肾组织中，抗氧化指标（SOD、CAT、GSH）以及Nrf2/HO-1通路关键因子（Nrf2、HO-1）的mRNA和蛋白表达均显著上调（P<0.05或P<0.01）；而氧化损伤产物（MDA）、炎症因子（IL-1β、IL-6、TNF-α）、肾损伤标志物（KIM-1）以及NF-κB p65的mRNA和蛋白表达均显著下调（P<0.05或P<0.01）。组织病理学检查显示，ATG治疗组大鼠的肾小管上皮细胞形态改善，萎缩、纤维化和炎性浸润减轻。本研究结果表明，ATG通过协同激活Nrf2/HO-1通路以增强抗氧化能力，并抑制NF-κB通路以减轻炎症反应，从而对GM所致AKI发挥多靶点治疗作用，为其临床转化提供了理论依据。
关键词：牛蒡子苷元；庆大霉素；急性肾损伤；核因子E2相关因子2/血红素加氧酶1信号通路；核因子κB信号通路摘 要：为评估长链非编码RNA（lncRNA）lnc-ISG20对转化生长因子β1（TGF-β1）诱导的肝星状细胞活化的作用，探究沉默lnc-ISG20抗肝纤维化的作用机制，本研究用GEO数据库分析lnc-ISG20在肝纤维化组织和正常肝组织中的表达差异。采用10 ng/mL的TGF-β1处理人肝星状细胞LX-2，建立肝纤维化细胞模型，并将其分为sh-NC组和sh-lnc-ISG20组，分别转染sh-NC质粒和sh-lnc-ISG20质粒。利用CCK-8试验检测各组LX-2细胞的生长曲线；利用流式细胞术检测各组LX-2细胞的周期分布和凋亡率；利用双荧光素酶报告试验验证lnc-ISG20与miR-20a-5p的靶向关系；利用GEO数据库分析lnc-ISG20与miR-20a-5p在肝纤维化组织中表达的相关性；利用qRT-PCR检测各组细胞中miR-20a-5p的表达水平；利用Western blotting检测MAPK/NF-κB信号通路蛋白p-P38、p-IκB、p-P65、p-ASK1的表达水平。试验结果表明：与正常肝组织相比，肝纤维化组织中lnc-ISG20表达升高（P<0.01）；与sh-NC组相比，sh-lnc-ISG20组LX-2细胞增殖活力降低（P<0.05），细胞周期被阻滞（P<0.01），细胞凋亡率增加（P<0.01）；miR-20a-5p是lnc-ISG20的靶基因（P<0.01）；肝纤维化组织中lnc-ISG20与miR-20a-5p表达呈负相关（P<0.01）；与sh-NC组相比，sh-lnc-ISG20组LX-2细胞miR-20a-5p表达升高（P<0.01），MAPK/NF-κB信号通路蛋白p-P38、p-IκB、p-P65、p-ASK1表达均降低（均P<0.01）；沉默lnc-ISG20通过升高miR-20a-5p表达，抑制TGF-β1诱导的LX-2细胞的增殖并促进细胞凋亡。本研究表明，lnc-ISG20有望成为肝纤维化治疗的分子靶标。
关键词：肝纤维化；lnc-ISG20；miR-20a-5p；肝星状细胞；细胞凋亡摘 要：为探索微小核糖核酸RNA-128-3p（miR-128-3p）调控沉默信息调节因子2相关酶1（SIRT1）/缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）通路对妊娠滋养层细胞增殖和侵袭的影响，收集2023年10月—2024年10月邯郸市中心医院子痫前期患者和正常足月孕妇胎盘组织，利用实时荧光定量聚合酶链式反应测定组织和细胞中miR-128-3p的表达。培养JEG-3细胞并分别转染anti-miR-128-3p、si-SIRT1，同时设置阴性对照，采用四甲基噻唑蓝（MTT）法测定JEG-3细胞活力，Transwell试验测定JEG-3细胞的迁移和侵袭，Western blot法检测细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子1A（P21）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、E-钙黏附素（E-cadherin）、SIRT1、细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、HIF-1α的蛋白表达，双荧光素酶试验验证miR-128-3p与SIRT1的靶向关系。试验结果表明：子痫前期组胎盘组织miR-128-3p水平比正常胎盘组织高（P<0.05）；抑制miR-128-3p表达后，P21、E-cadherin、HIF-1α蛋白表达量下降，而细胞存活率、迁移细胞数、侵袭细胞数及MMP-2、Cyclin D1、SIRT1蛋白表达升高（P<0.05）。SIRT1是miR-128-3p的靶基因，抑制miR-128-3p和SIRT1表达后，上述指标的表达均呈相反趋势（P<0.05）。过表达miR-128-3p可能通过调控SIRT1/HIF-1α通路抑制妊娠滋养层细胞增殖和侵袭。
关键词：miR-128-3p；SIRT1；缺氧诱导因子-1α；子痫前期；妊娠滋养层细胞增殖和侵袭摘 要：鼠李糖脂具有亲水基团，由1～2个分子的鼠李糖构成，是一种含有鼠李糖结构的脂类物质。作为一种生物表面活性剂，鼠李糖脂具有表面活性高、毒性低、可自然降解等特征，在石油工业、食品、医药、化妆品、绿色农业和生态环境等领域具有极大的潜在应用价值。本研究采用苯酚-硫酸法、蒽酮-硫酸法、3, 5-二硝基水杨酸法，以酶标仪替代传统的分光光度计，对鼠李糖脂的质量浓度进行测定，进而开发出微量快速检测鼠李糖脂质量浓度的方法，旨在实现快速、准确、灵敏的鼠李糖脂质量浓度测定。本试验确定了苯酚-硫酸法为鼠李糖脂质量浓度的最佳检测方法，成功建立了苯酚-硫酸法微量检测体系，并优化了检测条件。利用酶标仪检测发现，在479 nm处的吸光度值及标准曲线斜率均较高，可快速检测鼠李糖脂的质量浓度，节约时间，节省危化品，减少废弃物的产生，提高检测效率。苯酚-硫酸法微量检测体系的成功应用可实现大量样本的快速筛选，操作简单，减少了时间及人力成本，减少了对昂贵设备的依赖，可快速检测转化液中鼠李糖脂的质量浓度，为筛选高转化菌株奠定了基础。
关键词：鼠李糖脂；苯酚-硫酸法；蒽酮-硫酸法；3, 5-二硝基水杨酸法；高通量筛选摘 要：为探讨长链非编码RNA（lncRNA）BCAN-AS1在舌鳞状细胞癌中的表达以及BCAN-AS1/miR-1224-5p/Wnt轴调控舌鳞状细胞癌细胞增殖和侵袭的机制，本研究用cBioPortal数据库分析舌鳞状细胞癌组织中BCAN-AS1的表达，利用qRT-PCR检测BCAN-AS1在人正常口腔角质细胞（HOK）和舌鳞状细胞癌细胞（Tca8113、HNl3、SCC-9、TSCCA、SCC-15）中的表达。体外培养SCC-9细胞，并将其分为Con组（转染阴性质粒）和si-BCAN-AS1组（转染si-BCAN-AS1质粒）。利用克隆形成试验和Transwell试验分别检测各组SCC-9细胞的增殖和侵袭能力。利用双荧光素酶报告试验验证BCAN-AS1和miR-1224-5p的互补结合。利用cBioPortal数据库分析舌鳞状细胞癌组织中BCAN-AS1和miR-1224-5p表达的相关性。利用qRT-PCR检测miR-1224-5p在各组SCC-9细胞中的表达。利用Western blot法检测SCC-9细胞中Wnt/β-catenin通路蛋白的表达。与癌旁组织比较，BCAN-AS1在舌鳞状细胞癌组织中表达较高（P<0.01）。与HOK细胞相比，BCAN-AS1在Tca8113、HNl3、SCC-9、TSCCA、SCC-15细胞中表达均较高（P<0.01）。si-BCAN-AS1组细胞增殖能力和侵袭能力均低于Con组（均P<0.01）。BCAN-AS1可靶向结合miR-1224-5p（P<0.01）。舌鳞状细胞癌组织中BCAN-AS1和miR-1224-5p的表达呈现明显的负相关（P<0.01）。干扰BCAN-AS1表达后，SCC-9细胞中miR-1224-5p表达升高（P<0.01），Wnt/β-catenin信号通路蛋白β-catenin、Cyclin D1、с-mус、MMP-7表达均下降（均P<0.01）。舌鳞状细胞癌中BCAN-AS1高表达，下调BCAN-AS1可通过miR-1224-5p/Wnt/β-catenin轴调控舌鳞状细胞癌SCC-9细胞的增殖和侵袭。本研究表明，BCAN-AS1可能成为舌鳞状细胞癌靶向治疗的分子靶点。
关键词：BCAN-AS1；舌鳞状细胞癌；口腔角质细胞；miR-1224-5p；Wnt/β-catenin通路
